作者：方向明
出版社：浙江大学出版社
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麻醉实验学试读：
版权信息书名：麻醉实验学作者：方向明排版：KingStar出版社：浙江大学出版社出版时间：2013-03-20ISBN：9787308108645本书由浙江大学出版社有限责任公司授权北京当当科文电子商务有限公司制作与发行。— · 版权所有 侵权必究 · —图1-1-1 Balb/c小鼠CLP模型建立A：实验准备；B：备皮消毒，腹正中线1cm切口；C：暴露盲肠，盲肠多在左下腹处；D：确定回盲瓣位置，准备结扎；E：用4号线结扎盲肠根部；F：用22G穿刺针贯通穿刺盲肠一次；G：挤出少许粪便；H：盲肠还纳入腹腔；I：用4号线缝合腹膜；J：组织胶关腹；K：皮下补生理盐水1ml;L：编号，清醒后自由进食水。图1-1-2 盲肠结扎位置示意图图1-2-3图1-3-1 将小鼠放于热板上图1-3-2 小鼠出现舔足反应图1-4-2 线栓法阻塞大鼠大脑中动脉模型建立A：实验准备，器械灭菌消毒；B：麻醉大鼠，颈部剃毛；C：固定大鼠；D：备皮消毒，颈部正中切开，逐层分离至气管；E：暴露一侧颈部血管；F：分离并确定颈总动脉位置；G：暂时结扎颈总动脉；H：分离一侧颈内及颈外动脉；I：用动脉夹暂时夹闭颈内动脉；J：将颈外动脉剪断，近心端剪开一小切口；K：轻轻送入栓线；L：松开动脉夹，继续送送入栓线直至轻微阻力感；M：将栓线固定好，暂时缝合皮肤；N：经30min缺血时间后将皮肤重新打开，轻轻拔除栓线，取下颈总动脉上的缝线，扎紧颈外动脉切口，开放颈内动脉，完成再灌；O：重新缝合皮肤；P：将缝合好皮肤的大鼠放入保温箱中直至苏醒。图1-5-2 右侧颈内动脉置入血流动力学监测导管A．分离大鼠右侧颈总动脉；B-C．结扎颈总动脉远心端；D．近心端阻断颈总动脉血流；E-F．置入血流动力学监测导管图1-5-3 心脏原位结扎和拉线压管法建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型A．开胸、暴露大鼠心脏，分离大鼠左冠状动脉前降支（左前降支）; B．结扎左冠状动脉前降支；C．大鼠心脏及左冠状动脉前降支解剖图图1-5-5 左心室内注入5%伊文氏蓝A．结扎大鼠左冠状动脉前降支；B-C．大鼠左心室注入5%伊文氏蓝；D．大鼠左心室成功注入5%伊文氏蓝后心脏组织不同区域颜色（除左冠状动脉前降支供血区域以外，心脏组织均呈现深蓝色）图1-5-6 缺血再灌注损伤后心肌TTC染色结果蓝染区为非缺血区；苍白色为坏死心肌（坏死区），砖红色为缺血未坏死心肌+图1-6-1 MPTP转化为MPP的途径图1-6-2 正常及PD小鼠黑质TH阳性细胞与纹状体TH阳性纤维染色．Scale bars=100 μm图2-1-1 神经元MAP2免疫荧光染色图2-2-1 原代小胶质细胞的培养流程A：将铺被过多聚赖氨酸的培养瓶置于超净台中吹干；B：实验准备，取出灭菌的培养皿放置在冰板上；C：培养皿中加入预冷的解剖液；D：乳鼠消毒；E：乳鼠断头，做T型剪口，取脑；F：放入培养皿中漂洗；G：取皮层，小心剔除小脑、嗅球、基底脑组织、海马等；H：仔细除去脑膜以及血管；I：剪碎皮层组织；J：将剪碎的组织移入15 ml离心管；K：弃上清后，加入胰酶，37℃消化12 min; L：血清终止消化；M：轻轻吸取组织，重复洗涤2次；N：将组织转移到50 ml离心管；O：用5 ml枪带气泡吹打细胞悬液60～100次；P：静置1～2 min，转移上清到另外两个15 ml离心管中；Q:1200 r/min离心5 min; R：弃上清，加入培养液，转移至50 ml离心管；S：不带气泡吹打均匀，计数；T：种植到培养瓶中，37℃培养图2-2-2 小胶质细胞鉴定（Iba-1免疫荧光染色）图2-6-1 MTT流程A：实验准备，新鲜配制的MTT，取出细胞；B：小心吸弃培养液；C：每孔加入100 μl新鲜配制的MTT; D：加好MTT后，放入37℃培养箱中继续孵育2～4h; E：取出96孔板，小心吸弃上清液；F：每孔加入100 μl DMSO; G：轻拍490混匀；H：在酶标仪测定波长490 nm处吸光度（OD）图2-6-2 LDH流程A：实验准备，新鲜配制辅酶I; B：取出细胞，分别小心吸取出30 μl培养液，分别置于测定孔和空白孔；C：每孔加入50 μl基质缓冲液；D：测定孔每孔加2入10μl辅酶I，空白孔加入10μl ddHO; E：轻拍混匀，放入37℃反应15 min; F：取出96孔板，避光小心加入50 μl二硝基苯肼，轻拍混匀，37℃ 反应15 min; G：取出96孔板，小心加入50 μl NaOH; H：轻拍混匀，在酶标仪测定波长450 nm450处吸光度（OD）图2-7-3 自噬的形成过程[引自Yang Z, Klionsky DJ.Eaten alive:a history of macroautophagy.Nat Cell Biol. 2010,12（9）:814-22.]图2-7-4 电镜（左）和荧光显微镜（右）下观察自噬体（分别引自Noboru Mizushima, Tamotsu Yoshimori, and Beth Levine.Methods in Mammalian Autophagy Research.Cell,2010,140（3）:313-326．以及Sarkar S, Perlstein EO, Imarisio S, Pineau S, Cordenier A, Maglathlin RL, Webster JA, Lewis TA, O' Kane CJ, Schreiber SL, Rubinsztein DC.Small molecules enhance autophagy and reduce toxicity in Huntington' s dis-ease models.Nat Chem Biol,2007,3（6）:331-338）图2-7-5 pyroptosis的发生过程（引自Bergsbaken T, Fink SL, Cookson BT.Pyroptosis:host cell death and inflam-mation.Nat Rev Microbiol,2009,7（2）:99-109.）图2-7-6 七氟醚联合ATP活化触发caspase-1依赖的Pyroptosis图2-9-2 原代培养的MSC × 200A：细胞接种24小时后贴壁生长；B：培养14天的MSC,100%融合图2-9-3 MSC细胞向成骨细胞诱导分化后13d（× 200）A：茜素红染色可见桔红色的钙盐沉淀；B:ALP染色为阳性图2-9-4 MSC细胞向脂肪细胞诱导分化后15天A：可见胞浆有脂滴沉着；B：油红O染色可见细胞胞质内有红染脂滴，大小不等，部分脂滴发生融合图2-9-5 猪骨髓间充质干细胞A:EBM培养基中培养10天；B:EGM + VEGF培养基中诱导分化10天（引自Panka-jakshan D, Kansal V, Agrawal DK.In vitro differentiation of bone marrow derived por-cine mesenchymal stem cells to endothelial cells.J Tissue Eng Regen Med,2012）图2-9-6 猪MSC向内皮细胞诱导分化后vWF免疫荧光标记A：基本培养基中培养10天细胞vWF免疫荧光标记阴性；B:EGM+VEGF培养基中诱导分化10天细胞vWF免疫荧光标记阳性（引自Pankajakshan D, Kansal V, Agrawal DK.In vitro differentiation of bone mar-row derived porcine mesenchymal stem cells to endothelial cells.J Tissue Eng Regen Med,2012）图2-9-7 猪骨髓间充质干细胞DiI标记乙酰化极低密度脂蛋白摄入情况A：基本培养基中培养10天；B:EGM+VEGF培养基中诱导分化后10天（引自Panka-jakshan D, Kansal V, Agrawal DK.In vitro differentiation of bone marrow derived porcine mesenchymal stem cells to endothelial cells.J Tissue Eng Regen Med,2012）图2-9-9 培养28天的EPC细胞表面分子CD133、VEGFR-2、vWF表达A．细胞表达CD133; B．细胞表达VEGFR-2; C．细胞表达vWF; D～F．细胞F-actin表达作为对比试读结束[说明：试读内容隐藏了图片]