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查锡良《生物化学》（第7版）笔记和考研真题详解试读：
第1篇 生物大分子的结构与功能
第1章 蛋白质的结构与功能
1.1 复习笔记
一、蛋白质的分子组成
1蛋白质的一般组成
氨基酸是蛋白质的基本结构单位，蛋白质可在酸、碱或蛋白酶的作用下水解得到氨基酸。所有蛋白质均含有C、H、O、N四种元素，有的蛋白质还含有P、S等元素。
2氨基酸的结构
蛋白质的基本组成单位是氨基酸，组成人体蛋白质的20种氨基酸均属于L-α-氨基酸（甘氨酸除外），其分子中的4个基团——氨基、羧基、氢原子和R基团均连在同一个α-碳原子上，其中R基团为侧链基团，其通式如图1-1所示。
图1-1 α-氨基酸的结构通式
3氨基酸的分类
组成人体蛋白质的20种氨基酸依据其侧链结构和理化性质可分为以下5类：（1）非极性脂肪族氨基酸：有甘氨酸（Gly）、丙氨酸（Ala）、缬氨酸（Val）、亮氨酸（Leu）、异亮氨酸（Ile）、脯氨酸（Pro）。（2）极性中性氨基酸：有丝氨酸（Ser）、半胱氨酸（Cys）、甲硫氨酸（Met）、天冬酰胺（Asn）、谷氨酰胺（Gln）、苏氨酸（Thr）。（3）芳香族氨基酸：有苯丙氨酸（Phe）、酪氨酸（Tyr）、色氨酸（Trp）。（4）酸性氨基酸：有天冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）。（5）碱性氨基酸：有精氨酸（Arg）、赖氨酸（Lys）、组氨酸（His）。
4氨基酸的理化性质（1）两性解离及等电点（pI）
①两性解离
所有氨基酸都含有碱性的α-氨基和酸性的α-羧基，因此既可发生酸性解离也可发生碱性解离，为两性电解质。
②等电点
a．定义：氨基酸分子所带正负电荷相等时溶液的pH值称为氨基酸的等电点（pI）。当溶液pH＝pI时，氨基酸主要以两性离子形式存在；pH＜pI时，氨基酸主要以正离子形式存在；pH＞pI时，氨基酸主要以负离子形式存在。
b．pI的计算：通常氨基酸的pI是由α-羧基和α-氨基的解离常数的负对数pK和pK决定的，即pI＝1/2（pK＋pK）。1212（2）含共轭双键的氨基酸有紫外吸收特征
①定义
在近紫外区，色氨酸（Trp）、酪氨酸（Tyr）和苯丙氨酸（Phe）均有特征吸收峰。其中Trp的最大吸收波长为280nm；Tyr的最大吸收波长为275nm；Phe的最大吸收波长为257nm。
②意义
含有Trp、Tyr和Phe的蛋白质具有紫外吸收能力，一般最大光吸收在280nm波长处，故可通过测定蛋白质溶液280nm的光吸收值来分析溶液中蛋白质的含量。（3）茚三酮反应
在弱碱性溶液中，氨基酸与茚三酮水合物共热时，氨基酸被氧化脱羧、脱氨，而茚三酮则被还原，其还原物与氨基酸加热产生的氨结合，再与另一分子茚三酮作用生成蓝紫色化合物的反应称为茚三酮反应。此蓝紫色化合物在570nm处有最大吸收峰。该反应生成的蓝紫色混合物吸收峰值的大小与氨基酸释放出的氨量成正比，因此可作为氨基酸定量分析的方法。
二、蛋白质的分子结构
1蛋白质分子结构的基础（1）肽键
肽键是由一个氨基酸的α-羧基和另一个氨基酸的α-氨基共同脱去一分子水而形成的酰胺键。
图1-2 肽键组成示意图（2）肽
肽是指由一氨基酸的羧基和另一氨基酸的氨基脱水缩合形成的化合物，又称肽链。多肽是指由10个以上氨基酸相连而成的肽，10个以内氨基酸相连而成的肽成为寡肽。肽链中的氨基酸分子因脱水缩合而基团不全，被称为氨基酸残基。（3）体内存在的重要的生物活性肽
①谷胱甘肽（GSH）
谷胱甘肽是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成的三肽，其分子中半胱氨酸的巯基是该化合物的主要功能基团，该肽具有以下生物活性：
a．巯基具有还原性，故GSH可作为还原剂保护体内的蛋白质和酶分子；
b．清除体内的过氧化物，而本身被氧化成氧化型谷胱甘肽（GSSG）；
c．具有嗜核特性，与嗜电子毒物（如致癌物）结合，解除其毒性。
②多肽类激素及神经肽
如促肾上腺皮质激素（39肽）、促甲状腺素释放激素（3肽）、催产素（9肽）、加压素（9肽）等。
2蛋白质的分子结构
蛋白质复杂的分子结构一般分成4个层次，即一级、二级、三级和四级结构。其中后三者统称为高级结构或空间构象，即一条或数条多肽链上所有原子和基团在三维空间上的排布。表1-1 蛋白质的分子结构及维系键（1）蛋白质的一级结构
蛋白质的一级结构是指多肽链中氨基酸的排列顺序。其中维持蛋白质一级结构的主要化学键是肽键，另外蛋白质分子中所有二硫键的位置也属于一级结构。蛋白质的一级结构是理解蛋白质结构、作用机制、有类同功能的蛋白质相互关系的基础。（2）蛋白质的二级结构
常见的蛋白质二级结构有α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规卷曲。氨基酸残基的侧链影响二级结构的形成。
①α-螺旋结构
a．定义
α-螺旋是指蛋白质分子中多个肽键平面通过氨基酸α-碳原子的旋转，使多肽链的主链围绕中心轴呈有规律的螺旋式上升、盘旋形成的构象。
b．特点
第一，螺旋的走向为顺时针方向，即右手螺旋，氨基酸侧链伸向螺旋外侧；
第二，每3.6个氨基酸残基螺旋上升一圈（即旋转360°），螺距为0.54nm；
第三，相邻螺圈之间形成氢键，氢键的方向与螺旋长轴基本平形。肽链中的全部肽键都可形成氢键，以稳固α-螺旋结构。
②β-折叠
β-折叠是指两条或多条伸展的多肽链（或一条多肽链的若干肽段）侧向集聚，通过相邻肽链主链上的N-H与C＝O之间有规则的氢键，形成的锯齿状片层结构。表1-2 β折叠结构与a-螺旋结构对比
③β-转角
β-转角是指肽链出现180°左右转向回折时，形成的U形有规律的二级结构，由第一个氨基酸残基上的C＝O隔两个氨基酸残基，与第四个氨基酸残基上的-N-H形成的氢键来维持其稳定性。β-转角的结构较特殊，第二个残基常为脯氨酸。
④无规卷曲
无规卷曲，泛指那些不能被归入明确的二级结构，如折叠片或螺旋的多肽区段，是一类没有规律的松散结构。（3）蛋白质的三级结构
蛋白质的三级结构是指多肽链在二级结构的基础上进一步折叠、盘绕成复杂的空间结构。三级结构涉及蛋白质分子或亚基内所有原子的空间排布，但不涉及亚基之间的关系。主要靠非共价键来维持。蛋白质三级结构的形成和稳定主要靠次级键，如疏水作用、盐键、氢键和范德华力。（4）蛋白质的四级结构
蛋白质的四级结构由具有三级结构的蛋白质分子亚基按一定方式（以非共价键相连）聚合起来成蛋白质大分子。亚基，又称亚单位，是指具有三级结构的多肽链。在四级结构中，各亚基间的结合力主要是氢键和离子键。（5）超二级结构和结构域
①超二级结构和模体（motif）
a．超二级结构是指由2个或以上具有二级结构的肽段，在空间上相互接近，形成一个有规则的二级结构组合，如αα，βαβ，ββ等。
b．模体表示具有特定功能的或作为一个独立结构域一部分的相邻的二级结构的聚合体，一般被称为功能模体或结构模体，相当于超二级结构。如锌指结构。
②结构域
结构域是在二级结构的基础上，多肽链进一步折叠形成的结构紧密稳定，并各行其功能的区域。具有较为独立的三维结构。
三、蛋白质结构与功能的关系
1蛋白质一级结构是高级结构与功能的基础（1）一级结构是空间构象的基础。（2）一级结构相似的蛋白质具有相似的高级结构与功能。（3）氨基酸序列提供重要的生物进化信息。（4）重要蛋白质的氨基酸序列改变可引起疾病。
2蛋白质的高级构象决定蛋白质的功能
以血红蛋白（Hb）与肌红蛋白（Mb）举例说明，血红蛋白亚基与肌红蛋白亚基相似，也具有相似的功能；此外，蛋白质构象改变也可引发疾病，如朊病毒蛋白构象异变引发疯牛病。（1）血红蛋白与肌红蛋白的结构比较
二者都含有血红素辅基，血红素是铁卟啉化合物。
①肌红蛋白是由一条肽链和一个血红素辅基组成的结合蛋白。
②血红蛋白是一个由4个亚基（两个α亚基和两个β亚基）组成的四聚体。α和β亚基的三级结构几乎与肌红蛋白相同，只是肽链稍微短一点。一分子Hb可结合4分子氧。（2）血红蛋白的构象变化
肌红蛋白的功能是贮存和转运O到肌肉细胞中。而血红蛋白是2红细胞内运输氧的特殊蛋白质。血红蛋白的别构效应是说明蛋白质三维结构与功能关系的典型例子。
①血红蛋白存在两种主要构象态：T态和R态。氧结合引起血红蛋白构象发生变化。
a．T态又称紧张态，R态又称松弛态。O对R态血红蛋白的亲和2力明显高于T态，并且氧的结合更稳定了R态。缺氧时T态更加稳定，因此T态是去氧血红蛋白的主要构象，作为T态的去氧血红蛋白有专一的氢键和盐桥起着稳定作用。
b．R态是氧合血红蛋白的主要构象。
c．T态结合O后转变成R态，并使分子内一些盐桥断裂。2
②当氧与血红蛋白分子中1个亚基血红素的铁结合后，血红蛋白发生别构效应使它所在亚基的盐键破裂，从而使原来结合变得松散，易与氧结合；盐键的断裂使β-亚基与氧结合的速度加快。氧合反应最后使盐键全部断裂，整个血红蛋白的分子就成为氧合血红蛋白的构象，大大提高了氧的结合。（3）血红蛋白和肌红蛋白的氧合曲线
①血红蛋白含4个亚基，具有别构作用。血红蛋白的氧合具有正协同性同促效应，即一个O的结合增加同一血红蛋白分子中其余亚2基与O的亲和力，它的氧合曲线呈S形。2
②肌红蛋白只有一条多肽链，没有别构作用，它的氧合曲线是直角双曲线（图1-3）。
故Mb易与O结合，而Hb与O的结合在O分压较低时较难。222
图1-3 肌红蛋白和血红蛋白的氧合曲线
四、蛋白质的理化性质
1蛋白质的两性电离、等电点和电泳（1）蛋白质为两性电解质，其分子除两端的氨基和羧基可解离外，氨基酸残基侧链中某些基团，在一定pH条件下的溶液中都可解离成带负电荷或正电荷的基团。（2）蛋白质的等电点
①蛋白质的等电点（pI）是指蛋白质所带的正电荷数与负电荷数相等时溶液的pH。
②蛋白质溶液的pH大于等电点时，该蛋白质颗粒带负电荷，反之则带正电荷。（3）电泳：蛋白质在溶液中解离成带电颗粒，在电场中可以向与电荷相反的电极移动的现象。
2蛋白质的胶体性质
蛋白质的分子都很大，在水中形成胶体溶液，故具有胶体溶液的性质：丁达尔效应、布朗运动以及不能透过半透膜。维持蛋白质稳定的因素是胶体颗粒表面所带的电荷和水化膜。
3蛋白质的变性（1）蛋白质变性作用与凝固作用的定义
①蛋白质变性是指天然蛋白质受物理或化学因素的影响，分子内部的高度规则性的空间排列发生变化，致使其原有性质和功能发生部分或全部丧失的现象。
②凝固作用是指天然蛋白质变性后，所得的变性蛋白质分子互相凝聚或互相穿插缠结在一起的现象，是蛋白质变性后进一步发展的不可逆的结果。（2）变性蛋白质的特征
蛋白质变性后，其理化性质及生物学性质会发生改变，如溶解度降低、黏度增加、结晶能力消失、生物学活性丧失、易被蛋白酶水解等。（3）蛋白质变性的实质
蛋白质变性的实质是蛋白质分子中的次级键（主要是二硫键和非共价键）被破坏，引起天然构象解体，而一级结构仍保持完好。（4）引起变性的因素
①物理因素：高温、高压、紫外线、电离辐射及超声波等。
②化学因素：强酸强碱、有机溶剂、重金属盐、去污剂等。（5）蛋白质的复性
若引起变性的程度较温和，去除变性因素后，蛋白质重新恢复或部分恢复其构象和功能的过程称为复性。
4蛋白质沉淀（1）加酸沉淀蛋白质
加酸使达到蛋白质的等电点，溶解度减低而沉淀，浓酸可使蛋白质成为不溶性变性蛋白质而沉淀。（2）加中性盐沉淀蛋白质（盐析）
向蛋白质溶液中加入高浓度的中性盐使其沉淀析出的现象称为盐析，常用（NH）SO、NaSO、NaCl等作为蛋白质盐析剂。42424（3）加有机溶剂沉淀蛋白质
乙醇、丙酮能吸水，破坏蛋白质胶粒上的水化层，而使蛋白质沉淀。低温时，用丙酮脱水，还可保存原有的生物活性，但用乙醇脱水，时间较长后可使蛋白质变性沉淀。（4）加重金属盐沉淀蛋白质22＋＋
蛋白质在碱性溶液中带负电荷，可与重金属离子如Zn、Cu、2＋2＋2＋Hg、Pb、Fe等作用，产生重金属蛋白盐沉淀，故重金属中毒时，可口服大量牛奶、生蛋清等，有解毒作用。（5）加生物碱试剂沉淀蛋白质
生物碱试剂如单宁酸、苦味酸等都能沉淀蛋白质。其沉淀原理是一般生物碱试剂皆为酸性物质，而蛋白质在酸性溶液中带正电荷，故能与带负电荷的酸根相结合，成为溶解度很小的盐类而析出沉淀。
5蛋白质的紫外吸收
蛋白质中含有Trp、Tyr和Phe时，也具有紫外吸收能力，一般最大光吸收在280nm波长处，且蛋白质的A与其浓度成正比关系，因280此可通过测定蛋白质溶液280nm的光吸收值来分析溶液中蛋白质的含量。
6蛋白质的呈色反应（1）茚三酮反应
蛋白质经水解后产生的氨基酸可发生茚三酮反应，即与茚三酮水合物共热时，会发生反应，生成蓝紫色化合物。（2）双缩脲反应
蛋白质和多肽分子中的肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，生成紫红色或蓝紫色复合物的反应称为双缩脲反应。该反应是肽和蛋白质所特有的反应，氨基酸不出现此反应。且反应颜色的深浅与肽或蛋白质的含量成正比，因此可利用该反应测定蛋白质的含量和检测蛋白质的水解程度。
五、蛋白质的分离、纯化
1按蛋白质溶解度不同的分离方法（1）盐析
盐析是将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和且水化膜被破坏，导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。（2）有机溶剂沉淀
有机溶剂具有脱水作用，通过破坏蛋白质胶体的水化膜和电荷而使蛋白质溶解度降低而析出。如丙酮沉淀法。
2按蛋白质分子大小不同的分离方法（1）透析
透析是利用蛋白质不能透过半透膜的性质将其与其他小分子化合物分离的方法。（2）超滤法
超滤法是一种利用特别的薄膜对溶液中各种溶质分子进行选择性过滤的方法。（3）凝胶过滤法
凝胶过滤法利用不同蛋白质经过凝胶颗粒网是的速度不同，从而将混合蛋白质分开。当分子大小不同的蛋白质溶液加于层析柱时，小分子蛋白质能进入凝胶珠的孔内，在凝胶珠内滞留较长时间，大分子蛋白质不能进入孔内而直接流出，因此根据流出时间的不同可将大小不同的蛋白质分子分离。（4）超速离心法
在重力作用下，蛋白质在溶液中逐渐沉降，直至其浮力与离心所产生的力相等时，沉降停止。不同蛋白质其密度与形态各不相同，因此在一定的超速离心条件下，蛋白质分子因分子大小、密度、形态等不同而以不同的速度沉降，每一种蛋白质分子会形成一条特定的区带。该方法可用来分离纯化蛋白质、测定蛋白质的分子量。
3根据蛋白质带电性质不同分离（1）电泳法
电泳过程中，由于蛋白质所带电荷不同，在电场中的移动速度不同，可将不同蛋白质分离。依据支撑物的不同，电泳可分为薄膜电泳、凝胶电泳（常用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE）、等电聚焦电泳等。（2）离子交换层析法
离子交换层析法是指利用离子交换介质作为柱层析支持物，将带有不同电荷的生物大分子混合物分离的方法。
4应用亲和原理进行蛋白质分离（亲和层析）
亲和层析法是指利用某些生物大分子之间专一可逆结合特性的分离方法。将待纯化蛋白质的特异配体通过连接臂连到不溶性的载体上后以适当的缓冲液装入层析柱中。当蛋白质混合物流经此柱时，待纯化的蛋白质可特异地结合到相应的配体上，其他的蛋白质则不被结合，最后通过洗涤除去未结合的杂蛋白。
六、氨基酸序列以及蛋白质空间结构的测定
应用化学或反向遗传学方法可分析多肽链的氨基酸序列；应用物理学、生物信息学原理可进行蛋白质空间结构测定，如采用圆二色光谱测定溶液状态下的蛋白质二级结构含量，X射线衍射法和核磁共振技术研究蛋白质三维空间结构。
七、蛋白质的分类
蛋白质的分类如表1-3所示。表1-3 蛋白质的分类
1.2 考研真题详解
一、判断题
1参与蛋白质组成的氨基酸中Trp、Tyr和Phe在紫外区有光吸收，这是紫外吸收法定量蛋白质的依据。（ ）[中山大学2018研]【答案】对
2维持蛋白质结构稳定的两种共价键是肽键和二硫键。（ ）[华中农业大学2017研]【答案】错
3在高尔基复合体中，新合成的蛋白质除去信号序列，被糖基化。（ ）[南开大学2010研]【答案】错【解析】新合成的蛋白质除去信号序列，被糖基化，这个操作是在内质网中完成的。
4一级氨基酸就是必需氨基酸。（ ）[复旦大学2009研]【答案】错【解析】一级氨基酸是常见的20种氨基酸，而必需氨基酸是人体不能自身合成的，需要从食物中摄入的氨基酸，共有八种：赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸。
5蛋白质具有高级结构，而DNA和RNA没有高级结构。（ ）[中山大学2009研]【答案】错【解析】蛋白质具有高级结构，DNA和RNA也有高级结构。
6所有的丝氨酸蛋白酶都具有相同的催化三元体，所以它们都属于同源蛋白。（ ）[南京大学2009研]【答案】错【解析】同源蛋白是指在不同生物体内行使相同或相似功能的蛋白质。虽然所有的丝氨酸蛋白酶都具有相同的催化三元体，但是它们各自可以在同一生物体内具有不同的作用。
7蛋白质变性是指蛋白质受到某些理化因素的作用，其一级结构和高级结构都被破坏，生理功能随之丧失的现象。（ ）[华南农业大学2009研]【答案】错【解析】蛋白质变性是指蛋白质在某些物理和化学因素作用下其特定的空间构象被改变，从而导致其理化性质的改变和生物活性的丧失，其高级结构被破坏了但是其一级结构不会被破坏。
8一个化合物如果能同茚三酮反应生成紫色，说明这个化合物是氨基酸，肽和蛋白质。（ ）[江南大学2008研]【答案】错【解析】茚三酮除了能和氨基酸，肽和蛋白质反应外，它亦能和氨以及其他氨基化合物反应生成紫色。
9用凝胶过滤柱（如Sephadex G-100）层析分离蛋白质时，总是相对分子质量最小的先于相对分子质量大的下来。（ ）[厦门大学2008研]【答案】错【解析】用凝胶过滤柱层析分离蛋白质时，总是相对分子质量最大的先于相对分子质量小的下来。由于小分子物质能进入凝胶颗粒内部，用洗脱缓冲液洗脱时流出的速度慢；而大分子物质却被排除在凝胶颗粒外部，进入凝胶颗粒间的缝隙，洗脱时流出的速度较快。所以在洗脱过程中就会按相对分子质量的不同而分离蛋白质。
10蛋白质的二级结构决定了其生物活性。（ ）[哈尔滨工业大学2008研]【答案】错【解析】蛋白质的一级结构决定了其生物活性，不是二级结构。
11氨基酸与2,4-二硝基氟苯反应，首先被Edman用于鉴定多肽或蛋白质的N端氨基酸。（ ）[山东大学2006研]【答案】错【解析】氨基酸与2,4-二硝基氟苯反应，首先被Sanger用于鉴定多肽或蛋白质的N端氨基酸。
12蛋白质的结构域是介于三级结构和四级结构之间的一种结构层次，由氢键、盐键和疏水键维系其结构。（ ）[华东理工大学2006、2007研]【答案】错【解析】蛋白质的结构域是介于二级结构和三级结构之间的一种结构层次，由氢键、盐键和疏水键维系其结构。
13完全由非必需氨基酸组成的膳食，如果有充分的糖和脂肪同时给予，可以维持氮平衡。（ ）[浙江工业大学2006研]【答案】错【解析】完全由必需氨基酸组成的膳食，如果有充分的糖和脂肪同时给予，可以维持氮平衡。
14由于所有中性氨基酸的pI都很接近，因此在用阳离子交换剂分离时，实际是很难把它们分开的。（ ）[武汉大学2005研]【答案】错【解析】在用阳离子交换剂分离时，根据氨基酸的pI采用不同pH的洗脱液，用某一洗脱液洗脱时，对应的氨基酸不带电，然后就被洗脱下来了，所以中性氨基酸用阳离子交换剂把它们分离。
二、填空题
1成人血红蛋白是由4个亚基组成的结合蛋白，其氧饱和曲线为______型。[中山大学2018研]【答案】S
2在pH为7的缓冲液中，亮氨酸向______极移动，赖氨酸向______极移动。[华中科技大学2017研]【答案】正；负【解析】因为亮氨酸的等电点为5.98，小于7；赖氨酸的等电点为9.74，大于7。氨基酸在电场中移动的原则：①在等电点以上的任一pH，氨基酸带净负电荷，在电场中将向正极移动；②在低于等电点的任一pH，氨基酸带有净正电荷，在电场中将向负极移动；③在一定pH范围内，氨基酸溶液的pH离等电点愈远，氨基酸所携带的净电荷愈大。因此，在pH为7的缓冲液中，亮氨酸向正极移动，赖氨酸向负极移动。
3蛋白质折叠的推动力主要来自于非共价作用中的______。[中山大学2009研]【答案】疏水相互作用
4蛋白质完成一个α-螺旋需______个氨基酸残基，螺旋每上升一圈向上平移______nm，两个相邻氨基酸残基之间的轴心距为______nm。[南开大学2009研]【答案】3.6；0.54；0.15
5已知一种蛋白质的等电点为4.5，当蛋白质水溶液的pH为8.0时，该蛋白质应带______电荷，并______（能或不能）结合阳离子交换剂。[北京师范大学2009研]【答案】负；不能
6蛋白质的超二级结构有3种基本组合式______、______、______。维持蛋白质二级结构的主要化学键是______。[华南农业大学2009研]【答案】αα；βαβ；βββ；氢键
7在紫外有特征吸收峰的氨基酸有______、______、______等。[复旦大学2008研]【答案】苯丙氨酸（Phe）；酪氨酸（Tyr）；色氨酸（Trp）
8稳定蛋白质三维结构的作用力主要包括______，______，______和______。[厦门大学2008研]【答案】氢键；范德华力；疏水作用；二硫键
9测定蛋白质三维结构的主要方法包括______、______和电镜三维重构。[中国科学技术大学2008研]【答案】X-射线晶体衍射；核磁共振
10柱层析分析法中的分子筛作用是小分子物质走在______，大分子物质走在______。[南京师范大学2008研]【答案】颗粒内径中；颗粒间隙中
11当氨基酸溶液的pH＝pI时，氨基酸以______离子形式存在；当pH＞pI时，氨基酸以______离子形式存在。[哈尔滨工业大学2007研]【答案】兼性；负
12变性蛋白质同天然蛋白质的区别是______、______，不对称性增高以及其他物理化学常数发生改变。蛋白质变性的实质是______。[湖南大学2007研]【答案】生物活性丧失；溶解度降低；蛋白质分子中的次级键被破坏，引起天然构象解体
13胰岛素分子是由两条多肽链通过______连接而成。[郑州大学2007研]【答案】二硫键
14肌红蛋白与血红蛋白亚基的三级结构______，但它们的氨基酸序列______；从而，非常不同的______可以规定非常相似的______。[上海交通大学2006研]【答案】相似；差异很大；氨基酸序列；蛋白质三级结构
15______和______是相对分子质量小且含羟基的氨基酸，在一个肽链折叠的蛋白质中形成内部氢键。[浙江工业大学2006研]【答案】Ser；Thr
16对紫外区光线有吸收的氨基酸残基是______、______、______。[西北大学2004研]【答案】酪氨酸；苯丙氨酸；色氨酸
三、选择题
1肽键的化学本质是（ ）。[西医统考2018研]
A．氢键
B．盐键
C．酰胺键
D．疏水键【答案】C【解析】肽键是肽或蛋白质多肽链中连接两个氨基酸的酰胺键。因此答案选C。
2蛋白质α-螺旋的特点（ ）。[西医统考2017研]
A．多为左手螺旋
B．螺旋方向与长轴垂直
C．氨基酸侧链伸向螺旋外侧
D．靠盐键维系稳定性【答案】C【解析】A项，蛋白质α-螺旋呈右手螺旋。B项，螺旋方向与长轴平行。C项，蛋白质α-螺旋氨基酸侧链伸向外侧。D项，α-螺旋靠氢键稳固。
3“α-螺旋-β-转角-α-螺旋”属于的蛋白质结构是（ ）。[西医统考2016研]
A．一级结构
B．三级结构
C．模体
D．结构域【答案】C【解析】模体是指蛋白质分子中具有特定空间构象和特定功能的结构成分。α-螺旋-β-转角-α-螺旋为常见的模体，即具有特殊功能的超二级结构。
4蛋白质分子引起280nm光吸收的最主要成分是（ ）。[武汉大学2015研]
A．丝氨酸的-OH
B．半胱氨酸的-SH
C．苯丙氨酸的苯环
D．色氨酸的吲哚环
E．组氨酸的咪唑环【答案】D
5蛋白质变性后表现为（ ）。[武汉大学2015研]
A．黏度下降
B．溶解度增加
C．不易被蛋白酶水解
D．生物学活性丧失
E．易被盐析出现沉淀【答案】D【解析】蛋白质变性后，其溶解度降低、黏度增加、结晶能力消失、生物活性丧失，易被蛋白酶水解。
6关于蛋白质的β折叠片的叙述正确的是（ ）。[中国农业大学2010研]
A．氢键平行于多肽链走向
B．肽链氨基与羧基参与氢键形成
C．与R基位于折叠片同侧
D．氨基酸残基亲水【答案】B
7以下哪个是正确的？（ ）[浙江大学2009研]
A．氨基酸能作为质子的供体和受体
B．酸性越强，K值越高a
C．酸性越强，pH越小
D．氨基酸是两性的
E．均正确【答案】E
8在蛋白质结构分析中常以二硫键进行拆行，下列哪一试剂用于防止二硫键的再形成？（ ）。[南开大学2009研]
A．过甲酸
B．碘乙酸
C．巯基乙醇
D．二硫苏糖醇【答案】B
9应用SDS-聚丙酰胺凝胶电泳测定具有四级结构蛋白质时，所测得的分子质量应为（ ）。[南京师范大学2008研]
A．蛋白质分子量
B．蛋白质亚基分子量
C．蛋白质结构域分子量
D．蛋白质相对应的DNA分子量【答案】B
10在pH9的天冬氨酸溶液里，下列哪一种结构占优势？（ ）[南京大学2008研]
A．羧基氨基酸都不解离
B．只有α-羧基解离
C．α-羧基和β-羧基都解离
D．只有β-羧基解离【答案】C
11下列氨基酸酸中，属于酸性氨基酸的是（ ）。[西医统考2008研]
A．精氨酸
B．甘氨酸
C．亮氨酸
D．天冬氨酸【答案】D【解析】酸性氨基酸包括谷（谷氨酸）、天冬（天冬氨酸）。A项，精氨酸属于碱性氨基酸；BC两项，甘氨酸和亮氨酸属于非极性脂肪族氨基酸。
12如下陈述正确的是（ ）。[上海交通大学2007研]
A．海洋哺乳动物（如鲸）的Mb含量可能大大低于人类
B．Hb的氧气亲和力受有机磷酸化合物的调控，而Mb则不（受此调控）
C．Hb较Mb有较高的氧气亲和力
D．Hb和Mb的氧气亲和力都与pH无关
E．Mb的氧离解曲线是S形的，而Hb的氧离解曲线是抛物线形的【答案】B
13在蛋白质一级结构分析中，测定肽片断氨基酸序列的最佳方法是（ ）。[四川大学2007研]
A．Sanger试剂法
B．Edman降解法
C．ddNTP法
D．蛋白酶法【答案】B
14下列关于抗体分子的叙述哪项是错误的？（ ）[郑州大学2007研]
A．轻链的N-末端二分之一及重链的N-末端四分之一是可变区
B．重链的恒定区在同一类免疫球重击中是相同的
C．抗原结合部位位于轻链的N-末端可变区
D．经木瓜蛋白酶消化可将其轻链和重链分开【答案】D
15具有四级结构的蛋白质特征是（ ）。[华东理工大学2007研]
A．分子中必定含有辅基
B．在两条或两条以上具有三级结构多肽链的基础上，肽链进一步折叠，盘曲形成
C．每条多肽链都具有独立的生物学活性
D．依赖肽键维系四级结构的稳定性
E．由两条或两条以上具在三级结构的多肽链组成【答案】E
16利用流动相中的离子能与固定相进行可逆的交换性质来分离大分子化合物的方法是（ ）。[湖南大学2007研]
A．凝胶层析法
B．吸附层析法
C．分配层析法
D．亲和层析法
E．离子交换层析法【答案】E
17下列哪种氨基酸不属于必需氨基酸？（ ）[中国药科大学2006研]
A．苏氨酸
B．苯丙氨酸
C．组氨酸
D．蛋氨酸
E．赖氨酸【答案】C
18胰蛋白酶对肽链的水解位点是（ ）。[沈阳药科大学2006研]
A．谷氨酸残基的羧基所形成的肽键
B．赖氨酸残基的羧基所形成的肽键
C．谷氨酸残基的氨基所形成的肽键
D．赖氨酸残基的氨基所形成的肽键【答案】B
19分离含有二硫键的肽段可以用（ ）。[西北大学2004研]
A．SDS-PAGE电泳
B．对角线电泳
C．琼脂糖电泳
D．Western Blotting
E．上述技术都不可以【答案】B
四、名词解释
1凝胶过滤层析（gel filtration chromatography）[华中科技大学2017研]
答：凝胶过滤层析（gel filtration chromatography）又称为排阻层析或分子筛法，是指根据蛋白质的大小和形状进行分离和纯化的一种方法。凝胶过滤法所用的介质为凝胶珠，其内部为多孔网状结构，当分子大小不同的蛋白质溶液加于层析柱时，小分子蛋白质能进入凝胶珠的孔内，在凝胶珠内滞留较长时间，大分子蛋白质不能进入孔内而直接流出，因此根据流出时间的不同可将大小不同的蛋白质分子分离。一般是大分子先流出来，小分子后流出来。
2蛋白质变性[山东大学2017研]
答：蛋白质变性是指天然蛋白质受物理或化学因素的影响，分子内部的高度规则性的空间排列发生变化，致使其原有性质和功能发生部分或全部丧失的现象。
3超二级结构[华中师范大学2010；华中农业大学2017研]
答：超二级结构是指在多肽链内顺序上相互邻近的二级结构常常在空间折叠中靠近，彼此相互作用，形成规则的二级结构聚集体。目前发现的超二级结构有三种基本形式：α螺旋组合（αα）；β折叠组合（βββ）和α螺旋β折叠组合（βαβ），其中以βαβ组合最为常见。它们可直接作为三级结构的“建筑块”或结构域的组成单位，是蛋白质构象中二级结构与三级结构之间的一个层次，故称超二级结构。
4肽键（peptide bond）[中国科学技术大学2009研]
答：肽键是一个氨基酸分子的α-羧基和另一个氨基酸分子的α-氨基发生酰化反应，脱去一分子水形成的酰胺键。
5两性电解质[复旦大学2008研]
答：两性电解质就是既能当酸又能当碱用的电解质。两性电解质通常为两性元素的氧化物的水合物、氨基酸等。它们在溶液中存在着＋－＋两性离解平衡，既能离解出H离子又能离解出OH离子或者和H离子结合，既能与酸，也能与碱起反应而被中和。
6蛋白质的一级结构[东北师范大学2008研]
答：蛋白质的一级结构是指蛋白质分子多肽链中氨基酸的排列顺序。各种蛋白质中氨基酸排列顺序是由该生物遗传信息决定的，一级结构是蛋白质分子的基本结构，它是决定蛋白质空间构象的基础，而蛋白质的空间构象则是实现其生物学功能的基础。
7变构效应[四川大学2007研]
答：变构效应又称为别构效应，某种不直接涉及蛋白质活性的物质，结合于蛋白质活性部位以外的其他部位（别构部位），引起蛋白质分子的构象变化，而导致蛋白质活性改变的现象。
8Isoelectric point[郑州大学2007研]
答：Isoelectric point简写为pI，即等电点，在某一pH的溶液中，氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等，所带净电荷为零，呈电中性，此时溶液的pH称为该氨基酸的等电点。两性离子所带电荷因溶液的pH值不同而改变，当两性离子正负电荷数值相等时，溶液的pH值即其等电点；当外界溶液的pH大于两性离子的pI值，两性离子释放质子带负电；当外界溶液的pH小于两性离子的pI值，两性离子质子化带正电。
9蛋白质的复性[沈阳药科大学2006研]
答：发生可逆变性的蛋白质在一定条件下，无活性的构象重新恢复为有活性的天然空间构象，称为蛋白质的复性。
10凝胶电泳/SDS-PAGE[浙江工业大学2006研]
答：凝胶电泳是以凝胶为介质，在电场作用下分离蛋白质或核酸等分子的分离纯化技术。SDS-PAGE即为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，通常用于蛋白质分子量的测定，SDS即十二烷基硫酸钠，是一种变性剂，统一蛋白形状和表面电荷，泳动速率只跟分子质量有关。
11必需氨基酸[山东大学2005研]
答：必需氨基酸是人体（或其他脊椎动物）必不可少，而机体内又不能合成的，必须从食物中补充的氨基酸。对成人来讲必需氨基酸共有八种：赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸。如果饮食中经常缺少上述氨基酸，可影响健康。它对婴儿的成长起着重要的作用。对婴儿来说，组氨酸也是必需氨基酸。
12盐析[陕西师范大学2005研]
答：当盐离子浓度足够高时，很多蛋白质可以从水溶液中沉淀出来，这种现象称为盐析。盐析作用主要是由于大量中性盐的加入使水的活度降低，原来溶液中的大部分甚至全部的自由水转变为盐离子的结合水，蛋白质的水化层被破坏，因而被沉淀出来。盐析法沉淀出来的蛋白质一般不变性，且不同的蛋白质可以用不同浓度的盐沉淀出来，称作分段盐析。盐析法是对蛋白质进行粗分离的常用方法。
13Sanger反应[西北大学2004研]
答：在弱碱性溶液中，氨基酸的α-氨基容易与2,4-二硝基氟苯作用，生成稳定的黄色化合物2,4-二硝基苯氨基酸。由于Sanger在研究蛋白质一级结构时，广泛使用了这一反应，因而被称作Sanger反应。
五、问答题
1简述蛋白质二级结构的类型及基本结构特征。[华中农业大学2017研]
答：蛋白质二级结构是指肽链中的主链借助氢键，有规则的卷曲折叠成沿一维方向具有周期性结构的构象。蛋白质二级结构的类型有α-螺旋、β-折叠、β-转角、无规卷曲。（1）α-螺旋：肽链主链绕假想的中心轴盘绕成螺旋状，一般都是右手螺旋结构，螺旋是靠链内氢键维持。每个氨基酸残基（第n个）的羰基氧与多肽链C端方向的第4个残基（第n＋4个）的酰胺氮形成氢键。在典型的右手α-螺旋结构中，半径为0.23nm，螺距为0.54nm，每一圈含有3.6个氨基酸残基，每个残基沿着螺旋的长轴上升0.15nm。（2）β-折叠：折叠片的构象是通过一个肽键的羰基氧和位于同一个肽链或相邻肽链的另一个酰胺氢之间形成的氢键维持的。（3）β-转角：连接蛋白质分子中的二级结构（α-螺旋和β-折叠），使肽链走向改变的一种非重复多肽区，一般含有2至16个氨基酸残基。（4）无规卷曲：它泛指那些不能被归入明确的二级结构如折叠片或螺旋的多肽区段。
2试述蛋白质分子构象变化与其活力之间的关系。[暨南大学2011研]
答：蛋白质多种多样的功能与各种蛋白质特定的空间构象密切相关，蛋白质的空间构象是其功能活性的基础，构象发生变化，其功能活性也随之改变。蛋白质变性时，由于其空间构象被破坏，故引起功能活性丧失，变性蛋白质在复性后，构象复原，活性即能恢复。在生物体内，当某种物质特异地与蛋白质分子的某个部位结合，触发该蛋白质的构象发生一定变化，从而导致其功能活性的变化，这种现象称为蛋白质的别构效应。蛋白质（或酶）的别构效应，在生物体内普遍存在，这对物质代谢的调节和某些生理功能的变化都十分重要。
3肌红蛋白的功能、分子结构特点和氧结合曲线的特征，讨论可逆结合的分子基础。[中国农业大学2010研]
答：（1）肌红蛋白的功能。肌红蛋白分子中的血红素铁只与蛋白质链上一个组氨酸相连，尚有一个空的配位位置，能可逆地结合一个氧分子，对氧有高度的亲和性，具有储存氧的功能，当肌肉剧烈运动大量需氧时，可以释放储存的氧来供肌肉细胞使用。（2）肌红蛋白的分子结构特点。肌红蛋白是一条含有153个氨基酸残基的多肽链折叠形成的球状结构，有一个血红素辅基。由α-螺旋和无规卷曲共同构成的。有8段α-螺旋，分别用A，B，C，D，E，F，G，H表示，螺旋间是无规卷曲(位于螺旋段间拐角处)，肽链的羧基末端也是无规卷曲。极性氨基酸残基几乎全部分布于分子的表面，而非极性氨基酸残基则被埋在分子内部。辅基血红素位于肌红蛋白分子表面的一个洞穴内，并通过组氨酸残基与肌红蛋白分子内部相连。组氨酸与血红素辅基一起形成一个可以与氧可逆结合的位点。（3）肌红蛋白的氧结合曲线的特征。肌红蛋白只有一个亚基，没有四级结构，结合氧之后不会因为一个亚基的转变发生构象改变，即氧与肌红蛋白的结合没有别构效应，所以肌红蛋白在各种氧分压下都对氧有高度的亲和性，其氧结合曲线为一条双曲线。（4）可逆结合的分子基础。肌红蛋白只由一条肽链组成，含有一个血红素辅基。血红素是铁卟啉化合物，由4个吡咯通过4个甲炔基22＋＋相连成一个大环，Fe居于环中。含Fe的血红素能结合氧，而含3＋2＋Fe的不能结合氧。血红素的Fe与4个吡咯环的氮原子形成配位键，另2个配位键中的1个与F组氨酸结合，剩下的1个则可以与O进82行可逆结合。
4假定某蛋白相对分子质量为180KDa，其一级结构可能是直线式的也可能是闭环式的。请分析是否有可能的简单的合理方法加以鉴别？[中山大学2009研]
答：可以用Sanger反应或Edman反应对蛋白质的N末端氨基酸进行测定。
Sanger反应中，FDNB可以与肽链N末端氨基酸的α-氨基反应生成黄色的DNP-氨基酸。经Sanger反应若该蛋白的一级结构是直链式的，则可产生黄色的反应；若该蛋白是闭环式的，由于N末端没有α-氨基，则不能出现黄色的反应。而Edman反应中，肽链N末端氨基酸的α-氨基可与苯异硫氰酸酯反应生成PTH-氨基酸，用三氟乙酸处理释放出PTH-氨基酸，再用有机溶剂萃取出来，通过色谱分析可以鉴定出PTH-氨基酸。经Edman反应后，若能测出N末端氨基酸，则该蛋白为直链式；若测不出，则该蛋白为闭环式。
另外，理论上讲，如果知道序列，可以找一种合适的蛋白酶切断某一位点，再进行电泳，若该蛋白是闭环式，则电泳结果只产生一条带，且大小不变；若是直链式，则会产生两条带，分子量加起来正好180KDa。
5今有以下四种蛋白质的混合物：（A）相对分子质量12000，pI 10；（B）相对分子质量62000，pI 4；（C）相对分子质量28000，pI 7；（D）相对分子质量9000，pI 5。若不考虑其他因素，当它们：（1）流过DEAE-纤维素阴离子交换柱，用缓冲液pH8.8 和线性NaCl盐梯度洗脱时；（2）流经Sephadex G-75凝胶过滤柱时，这些蛋白质的洗脱顺序如何？并简单说明原因。[华南农业大学2009研]
答：（1）在DEAE-纤维素阴离子交换柱层析中，蛋白质有不同的pI，在同一pH下，各种蛋白质所带的电荷的种类和数量不同，因此与离子交换剂的吸附作用的强弱不同。带负电荷少，吸附能力弱的先洗脱下来，带负电荷多，吸附能力强的后洗脱下来，从而将蛋白质混合物分开，据此分析可知四种蛋白质的洗脱顺序为：（A）、（C）、（D）、（B）。（2）在Sephadex G-75凝胶过滤柱时，小颗粒（小分子质量）进入凝胶的孔内扩散，流动速度慢，后洗脱；大颗粒（大分子量）不进入凝胶的孔内，滑动速度快，先洗脱。据此分析可知四种蛋白质的洗脱顺序为：（B）、（C）、（A）、（D）。
6试写出下列生化名词缩写的中文名称以及它们在生物化学中的应用。（1）HPLC（2）FPLC（3）SDS-PAGE（4）ELISA（5）RT-PCR（6）HIC（7）IEF。[南京大学2008研]
答：如表1-4所示：表1-4
7比较蛋白质α-螺旋中的氢键和DNA双螺旋中的氢键，并指出氢键在稳定这两种结构中的作用。[郑州大学2007研]
答：蛋白质α-螺旋的稳定性是靠链内氢键维持的，是由每个氨基酸残基的N—H于前面隔3个氨基酸的C＝O形成，肽键上所有的肽链都参与氢键的形成，故α-螺旋相当稳定。在DNA双螺旋中：①稳定双螺旋的最重要因素是碱基堆积力；②碱基配对的氢键，GC含量越多，DNA双螺旋越稳定。在α-螺旋中，一个残基上的羧基氧与旋转一圈后的（该残基后面）第四个残基上的α-氨基中的氮形成氢键，这些在肽链骨架内原子间形成的氢键大致平行于该螺旋的轴，氨基酸侧链伸向骨架外，不参与螺旋内的氢键形成。在双链DNA中糖-磷酸骨架不形成氢键，相反在相对的两条链中互补的碱基之间形成2个或3个氢键，氢键大致垂直于螺旋轴。
在α-螺旋中，单独的氢键是很弱的，但是这些键的合力稳定了该螺旋结构。尤其是在一个蛋白质的疏水内部，这里水不与氢竞争成键。在DNA中形成氢键的主要作用是使每一条链能作为另一条链的模板，尽管互补碱基之间的氢键帮助稳定螺旋结构，但在疏水内部碱基对之间的堆积对螺旋结构的稳定性的贡献更大。
在蛋白质多肽链的α-螺旋中，多肽主链上的第n个残基的羧基氧与沿螺旋指向的第n＋4个残基的酰胺基的氢之间形成氢键,这些氢键大体上与螺旋轴平行。残基的侧链从主链中生出，不出现在螺旋之内，不参与螺旋内的氢键形成。在DNA的双螺旋中，氢键的形成不涉及糖-磷酸骨架，氢键是在两个反向平行的多核苷酸的碱基对之间形成的，每个碱基对可形成两个或三个氢键，氢键大体上与螺旋轴垂直。
8蛋白质结构与功能的关系？[哈尔滨工业大学2007研]
答：（1）蛋白质一级结构与功能的关系。
①一级结构是空间构象的基础。例如，RNase是由124氨基酸残基组成的单肽链，分子中8个Cys的—SH构成4对二硫键，形成具有一定空间构象的蛋白质分子。在蛋白质变性剂和一些还原剂存在下，酶分子中的二硫键全部被还原，酶的空间结构破坏，肽链完全伸展，酶的催化活性完全丧失。当用透析的方法除去变性剂和巯基乙醇后，发现酶大部分活性恢复，所有的二硫键准确无误地恢复原来状态。若用其他的方法改变分子中二硫键的配对方式，酶完全丧失活性。这个实验表明，蛋白质的一级结构决定它的空间结构，而特定的空间结构是蛋白质具有生物活性的保证。
②蛋白质一级结构决定其高级结构，因此最终决定了蛋白质的功能。例如，84个氨基酸的胰岛素原，胰岛素原也没活性，在包装分泌时，A、B链之间的33个氨基酸残基被切除，才形成具有活性的胰岛素。
③功能相似的蛋白质往往能显示它们在进化上的亲缘关系：比较不同来源的细胞色素C发现，与功能密切相关的氨基酸残基是高度保守的，这说明不同种属具有同一功能的蛋白质，在进化上来自相同的祖先，但存在种属差异。不同种属间的同源蛋白质一级结构上相对应的氨基酸差别越大，其亲缘关系愈远，反之，其亲缘关系愈近。
④许多疾病都是由于相关蛋白质结构异常引起的。基因突变导致蛋白质一级结构改变而产生的遗传病。称之为分子病。如镰刀型贫血症是由于血红蛋白的β-亚基上的第六位氨基酸由谷氨酸变成了缬氨酸，导致血红蛋白的结构和功能的改变，其运输氧气的能力大大地降低，并且红细胞呈镰刀状。
所以，蛋白质一定的结构执行一定的功能。功能不同的蛋白质总是有着不同的序列；比较种属来源不同而功能相同的蛋白质的一级结构，可能有某些差异，但与功能相关的结构也总是相同的。若一级结构变化，蛋白质的功能可能发生很大的变化。（2）蛋白质的空间结构与功能的关系。各种蛋白质都有特定的空间构象，而特定的空间构象又与它们特定的生物学功能相适应，蛋白质的结构与功能是高度统一的。
例如，Hb与O结合后，Hb的构象发生变化，这类变化称为变构2效应，即通过构象变化影响蛋白质的功能。像血红蛋白这种具有变构效应的蛋白质称为变构蛋白。血红蛋白的这种变构效应能更有效地行使其运氧的生物学功能。
9自然界的生物多种多样，因而蛋白质的种类和功能也十分繁多，没有蛋白质也就没有生命，试述蛋白质的功能多样性及其意义。[华东理工大学2007研]
答：蛋白质的功能多样性及其意义具体如下：（1）构造、更新、修补功能：蛋白质是一切生命的物质基础，是肌体细胞的重要组成部分，细胞在代谢中蛋白质的更新以及细胞分裂、个体成长都必须要蛋白质的供给和补充。各种因素造成细胞破损、组织创伤时，也需要蛋白质作为修补的原料。（2）催化、调节功能：物质代谢依靠生物催化酶。已知的二千多种酶的化学本质都是蛋白质。除酶以外，还需要一些调控物质来控制各种代谢途径的相互配合，使其成为一个完整的生命活动过程。其中许多调控物质，如胰岛素、生长素、胸腺素和多种促激素的化学本质也是蛋白质。（3）转运、储存功能：体内一些小分子物质和疏水性物质的转运主要靠血液中特异的蛋白质来转运的。肝脏中的铁离子以铁蛋白复合体的形式储存。（4）运动、支持作用：生物体的一切活动都伴有肌肉的收缩和舒张，都是由肌动蛋白和肌球蛋白等相互作用来完成。皮肤、骨骼和肌腱的胶原纤维主要含有胶原蛋白，它具有强烈的韧性，从而保证这些组织的功能。（5）免疫、保护功能：生物体的免疫功能与抗体有关，而抗体是一类特异的球蛋白，对细菌、病毒和异体蛋白有高度的识别能力，并与之结合使其失活，从而保护生物体的正常机能状态。（6）生长、繁殖功能：生物的生长、繁殖、遗传和变异都与核蛋白有关。核蛋白是核酸和蛋白质组成的结合蛋白质，由组蛋白和阻遏蛋白来控制调节。（7）载体、受体：存在于生物膜上起着转运物质和传递信息的蛋白质，载体将胞外物质送入胞内；受体将信息带入胞内。（8）氧化供能功能：体内组织蛋白质分解为氨基酸后，经脱氨基作用生成α-酮酸，后者参加三羧酸循环氧化分解，释放能量。
10今有以下四种蛋白质的混合物：①分子量50000，pI＝10；②分子量72000，pI＝3.5；③分子量31000，pI＝7；④分子量12000，pI＝5，用中性盐梯度洗脱时，若不考虑其他因素：（1）它们流过DEAE-纤维素阴离子交换柱；（2）流经Sephadex G-100凝胶过滤柱时，这些蛋白质的洗脱顺序如何？[四川大学2006研]
答：（1）用DEAE-纤维素阴离子交换柱分离蛋白质，在一定的pH条件下，等电点pI＞pH的蛋白质带正电，不能与阴离子交换剂结合；等电点pI＜pH的蛋白质带负电，能与阴离子交换剂结合，一般pI越大的蛋白质与阴离子交换剂结合力越弱，首先被洗脱下来。比较4种蛋白质的等电点pI：①＞③＞④＞②。所以，当它们流过DEAE-纤维素阴离子交换柱，洗脱顺序为①→③→④→②。（2）凝胶过滤是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。小分子物质能进入其内部，流下时路程较长，而大分子物质却被排除在外部，下来的路程短，因此大分子先流出来，小分子后流出来。比较这4种蛋白质的分子量：②＞③＞①＞④。所以，流经Sephadex G-100凝胶过滤柱时，洗脱顺序为②→③→①→④。
11蛋白质电泳基本原理及影响电泳速度的主要因素。[山东大学2006研]
答：（1）蛋白质电泳基本原理。
蛋白质是一种两性电解质，它同时具有游离氨基和羧基。每种蛋白质都有它自己的等电点。等电点的高低取决于蛋白质的性质，在等电点时，蛋白质所带的正负电荷相等。在pH大于等电点溶液中，羧基解离多，此时蛋白质带负电荷，带负电荷的蛋白质在电场中向正极移动。反之，在pH小于等电点的溶液中，氨基解离多，此时蛋白质带正电荷，在电场中向负极移动。这种带电质点在电场中向着带异相电荷的电场移动，称为电泳。带电质点所以能在电场中移动以及具有一定的移动速度，取决于其本身所带的电荷、电场强度、溶液的pH值、黏度以及电渗等因素。（2）影响电泳的因素。
不同带电质点在同一电场中的迁移率（或泳动度）不同，影响迁移率的因素有：
①带电质点的性质。颗粒所带净电荷的量，颗粒大小及形状等。带电荷越多，分子越小，泳动速度越快。
②电场强度。电场强度是单位厘米的电位差。电场强度越大，带电质点泳动速度越快。反之亦然。
③溶液中pH值。溶液的pH值决定了带电质点的解离程度，也决定了物质所带电荷的多少。对蛋白质、氨基酸等两性电解质而言，pH值离等电点越远，颗粒所带的电荷越多，电泳速度也越快。反之则越慢。蛋白质在酸性溶液中易变性，在偏碱溶液中比较稳定，所以蛋白质电泳大多用pH8.2～8.8的巴比妥或硼酸缓冲液，在这种pH中，血清蛋白一般都带负电荷。
④溶液的离子强度。溶液的离子强度越高，颗粒泳动速度越慢，反之越快。血清电泳一般最适宜离子强度在0.025～0.075之间。离子强度越低，缓冲液的电流下降，扩散现象严重，使分辨力明显降低。离子强度太高，将有大量的电流通过琼脂板，由此而产生的热量使板中水分大量蒸发，严重时可使琼脂板断裂而导致电泳中断。溶液中离子强度与溶液的浓度成正比。
⑤电渗作用。电渗是在电场中液体对于固体支持物的相对移动。2－由于琼脂中含有SO，带负电荷，造成静电感应致使附近的水带正4电荷，而向负极移动，所以电泳时有两种力，即电泳力和电渗力。如果物质原来带正电荷，向负极移动，则因电渗作用向负极移动得更快。如果物质向正极移动，所带电荷少，电泳力抵不过电渗力，则也向负极移动，血清中的γ球蛋白就是如此。
⑥吸附作用。即介质对样品的滞留作用。它导致了样品的拖尾现象而降低了分辨率。纸的吸附作用最大，醋酸纤维膜的吸附作用较小或无。
⑦电泳时间，电泳时间与迁移率成正比。
12有一个五肽，加酸水解得Leu、Ala、Tyr利Lys；用羧肽酶水解得酪氨酸；用胰蛋白酶水解得三组分：（1）Lys、Tyr；（2）Tyr；（3）Lys、Leu、Ala；用丹磺酰氯处理，再用酸水解得赖氨酸的荧光衍生物。试说明此肽的氨基酸序列。[北京师范大学2005研]
答：（1）加酸水解得Leu、Tyr、Lys、Ala，说明此五肽由Leu、Tyr、Lys、Ala组成。
试读结束[说明：试读内容隐藏了图片]